优诺科技反相色谱柱清洗及再生

当色谱柱压力升高,色谱柱峰形发生变化如出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔,分离度降低,这些都强烈提示色谱柱受到污染。

可采用以下步骤处理:

  • 如系统接有在线过滤器和保护柱,首先排查在线过滤器与保护柱,进行更新替换。日常操作中,当压力升高10%或柱效降低10%时,就应考虑更换在线过滤器和/或保护柱。
  • 使用高比例的有机溶剂进行冲洗(请注意避免盐析出,通常可使用梯度升高法,然后维持在高比例甚至100%有机溶剂条件下)。此操作通常可洗去大部分污染物。
  • 如有机溶剂清洗不能解决问题,可采用如下方法进行色谱柱的清洗和再生。根据样品性质以及你所了解的污染物性质选择清洗方法,用20倍柱体积(即,对于4.6x250mm柱,相当于80mL)的HPLC级溶剂清洗色谱柱,将流动相温度升至35-55˚C可提高清洗效率。
  • 可以考虑对色谱柱进行倒冲,特别是当问题表现为压力急剧升高,提示有颗粒型物质直接堵塞于色谱柱入口端筛板处时。操作时,将色谱柱倒接,并与检测器断开。使用低流速0.2ml/min,进行过夜冲洗,并封堵检测器入口及出口端以免溶剂挥干产生气泡。甚或,将色谱柱小心的打开,直接更换柱入口端筛板。
  • 备注:以上冲洗和再生程序为反冲!

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